Plásmido Doble Nickase (h) GM130: sc-400787-NIC

GOLGA2 codifica la proteína de la matriz del cis-Golgi GM130, un andamiaje central para la organización de la cinta del Golgi y el anclaje (tethering) de vesículas, que favorece un transporte eficiente del retículo endoplásmico (RE) al Golgi y el apilamiento de cisternas. GM130 se coordina con factores de anclaje y redes de tráfico reguladas por pequeñas GTPasas para mantener la arquitectura del Golgi durante la interfase y promover su reensamblaje tras la mitosis, influyendo en la secreción polarizada y el posicionamiento de los orgánulos. A través de sus funciones en el tráfico de membranas, el procesamiento de proteínas y la dinámica del Golgi ligada al ciclo celular, las alteraciones en la función de GM130 son relevantes para las respuestas al estrés celular, los fenotipos de migración y las perturbaciones de la estructura del Golgi asociadas a enfermedad descritas en múltiples contextos biológicos.

GM130 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GOLGA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GOLGA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GOLGA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GOLGA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.