Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GM-CSFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-419841-KO-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- GM-CSFRα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im GM-CSFRα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GM-CSFRα: sc-456
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GM-CSFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) | sc-419841-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Csf2ra kodiert die Alpha-Kette des Rezeptors für den Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktor (GM-CSFRα). Diese verleiht die Ligandenbindungsspezifität und bildet zusammen mit der gemeinsamen Beta-Kette einen Rezeptorkomplex, der in myeloischen Zellen die Signalübertragung initiiert. Nach Bindung von GM-CSF aktiviert dieser Komplex die Signalwege JAK2/STAT5, MAPK/ERK und PI3K/AKT und reguliert so Proliferation, Überleben, Differenzierung und funktionelle Aktivierung von Granulozyten und Makrophagen. Die von GM-CSFRα abhängige Signalgebung beeinflusst entzündliche Zytokinprogramme sowie die Homöostase angeborener Immunzellen in hämatopoetischen Geweben. Eine Fehlregulation der GM-CSF-Achse wird mit immunvermittelten Entzündungen und myeloischen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, wodurch Csf2ra einen relevanten Angriffspunkt für mechanistische Studien in Modellen entzündlicher und hämatopoetischer Erkrankungen darstellt.
Das GM-CSFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Csf2ra-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Csf2ra-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Csf2ra nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GM-CSFRα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Csf2ra-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GM-CSFRα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Csf2ra-Exone abzielen, die für die GM-CSFRα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Csf2ra-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom GM-CSFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GM-CSFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Csf2ra-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GM-CSFRα HDR-Plasmid (m) und GM-CSFRα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Csf2ra-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Csf2ra-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.