Plasmide Double Nickase (h) GlyR α2: sc-402179-NIC

GLRA2 code pour la sous-unité alpha-2 (GlyR α2) du récepteur à la glycine, un canal chlore ligand-dépendant de la famille des récepteurs à boucle Cys (Cys-loop) qui médie une neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central. GlyR α2 contribue à la signalisation glycinergique synaptique et extrasynaptique, qui façonne l’excitabilité neuronale, la synchronisation des réseaux et l’équilibre entre excitation et inhibition via la conductance du chlorure. Ce récepteur participe à des processus neurodéveloppementaux, notamment la maturation des synapses et l’affinement des circuits, et sa fonction s’articule avec des voies régissant la transmission synaptique inhibitrice et l’homéostasie ionique. Des altérations de la signalisation glycinergique ainsi que des modifications de la séquence ou de l’expression de GLRA2 ont été associées, dans des études génétiques et fonctionnelles, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des troubles liés aux crises ou à l’hyperexcitabilité, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche en neurosciences mécanistiques.

GlyR α2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLRA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLRA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLRA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLRA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.