Plasmide CRISPR d'Activation (h) GlyR α1: sc-404734-ACT

GLRA1 code la sous-unité alpha 1 du récepteur à la glycine (GlyR α1), un canal chlore ligand‑dépendant qui assure une neurotransmission inhibitrice rapide dans la moelle épinière, le tronc cérébral et d’autres régions du système nerveux central. Lors de la liaison de la glycine, GlyR α1 favorise l’entrée d’ions chlorure, entraînant une hyperpolarisation des neurones, et participe ainsi à la mise en place des circuits de contrôle moteur, au filtrage sensoriel et aux voies du réflexe de sursaut. La fonction du récepteur est régulée par l’échafaudage synaptique et l’organisation des synapses inhibitrices, notamment via des interactions avec la géphyrine qui influencent le regroupement des récepteurs et la stabilité postsynaptique. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de GLRA1 sont associées à des troubles de la signalisation inhibitrice tels que l’hyperekplexie, ainsi qu’à des phénotypes plus larges impliquant l’excitabilité neuronale et des dysfonctionnements moteurs.

GlyR α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLRA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GlyR α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLRA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLRA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GlyR α1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLRA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GlyR α1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GlyR α1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GLRA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.