Partículas Lentivirales de Activación (m2) glypican-4: sc-420640-LAC-2

El gen Gpc4 de ratón codifica la glicipina-4, un proteoglicano de heparán sulfato anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se localiza en la superficie celular y en la matriz extracelular para regular la distribución de morfógenos y factores de crecimiento. La glicipina-4 modula vías de señalización que incluyen Wnt/β-catenina, FGF y BMP al moldear las interacciones ligando–receptor y establecer gradientes que influyen en la proliferación, la diferenciación y el patrón tisular durante el desarrollo. La actividad o expresión alteradas de Gpc4 se asocian con una señalización extracelular desregulada y se han investigado en contextos como la homeostasis metabólica, la biología del tejido adiposo y procesos del neurodesarrollo, lo que la hace relevante para estudios de la genética de rasgos complejos. La edición génica de Gpc4 en modelos murinos permite la disección mecanística de la señalización dependiente de heparán sulfato, la comunicación célula–célula y la regulación de la matriz extracelular en fenotipos del desarrollo y asociados a enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral glypican-4 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Gpc4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral glypican-4 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Gpc4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de glypican-4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Gpc4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.