Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glycodelin: sc-403687-ACT

PAEP code la glycodeline, une glycoprotéine sécrétée également appelée protéine endométriale associée à la progestérone, dont l’expression est fortement régulée par des signaux hormonaux dans les tissus reproducteurs. La glycodeline contribue à la communication cellule–cellule à l’interface materno-fœtale, module l’activité des cellules immunitaires et influence la différenciation épithéliale ainsi que le remodelage tissulaire via des interactions récepteur–glycane dépendantes des glycannes. Une expression altérée de PAEP a été rapportée dans la biologie de l’endomètre et de l’ovaire et fait fréquemment l’objet d’études sur l’implantation, l’inflammation et la modulation immunitaire associée aux tumeurs. En tant que facteur sécrété, la glycodeline est également étudiée comme candidat biomarqueur dépendant du contexte et comme nœud mécanistique reliant la signalisation endocrine à la tolérance immunitaire locale.

Glycodelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PAEP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glycodelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PAEP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PAEP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glycodelin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PAEP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glycodelin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glycodelin dans les cellules tumorales présentant une expression de PAEP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.