Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double Nickase Plasmid (h): sc-405279-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double-Nickase-Plasmid (h) und Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPX5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glutathione Peroxidase 5/GPX5: sc-390092
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405279-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405279-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **GPX5** kodiert **Glutathionperoxidase 5**, ein selenabhängiges antioxidatives Enzym, das Wasserstoffperoxid und Lipidhydroperoxide unter Verwendung von Glutathion reduziert und so oxidative Schäden begrenzt. Die GPX5-Aktivität unterstützt die Redox-Homöostase und hilft, durch oxidativen Stress ausgelöste Auswirkungen auf die Membranintegrität, Proteinoxidation sowie nachgeschaltete Signalwege zu begrenzen, die mit Entzündung und Apoptose verknüpft sind. Obwohl GPX5 am besten im männlichen Reproduktionstrakt charakterisiert ist, verbindet seine Regulation und antioxidative Funktion es mit breiteren zellulären Reaktionen auf reaktive Sauerstoffspezies und oxidative Schädigung. Eine dysregulierte Redox-Kontrolle unter Beteiligung von Glutathionperoxidasen wird häufig in Kontexten wie Infertilität, metabolischem Stress und Tumorbiologie untersucht, in denen reaktive Sauerstoffspezies die genomische Stabilität und Entscheidungen über das Zellschicksal beeinflussen.
Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPX5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPX5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPX5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPX5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.