Plásmido Doble Nickase (m) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-436949-NIC

El gen **Gpx4** del ratón codifica la glutatión peroxidasa 4 (GPX4), una selenoenzima que reduce los hidroperóxidos de fosfolípidos dentro de las membranas celulares utilizando glutatión, preservando así la integridad de la membrana y la homeostasis redox. GPX4 es un supresor central de la ferroptosis al limitar la peroxidación lipídica impulsada por el hierro, e interactúa con redes antioxidantes como el metabolismo del glutatión y la respuesta al estrés oxidativo regulada por NRF2. La alteración de la función de GPX4 modifica la señalización mitocondrial y lipídica, influye en las respuestas inflamatorias al estrés y afecta la supervivencia celular bajo estrés oxidativo y metabólico. La actividad desregulada de GPX4 se ha implicado en modelos experimentales de neurodegeneración, lesión por isquemia-reperfusión y biología tumoral, a través de su control de la peroxidación lipídica y de la sensibilidad a la ferroptosis.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Gpx4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Gpx4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Gpx4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Gpx4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.