Plásmido Doble Nickase (h) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-401558-NIC

GPX4 codifica la glutatión peroxidasa 4, una selenoenzima que reduce los hidroperóxidos de fosfolípidos en las membranas celulares utilizando glutatión, limitando así la peroxidación lipídica y preservando la integridad de la membrana. Al contener el daño impulsado por especies reactivas de oxígeno, GPX4 es un supresor central de la ferroptosis y se relaciona con el metabolismo del glutatión, la homeostasis redox y las vías de remodelación lipídica. La actividad de GPX4 influye en la función mitocondrial, la señalización inflamatoria y la proteostasis en condiciones de estrés oxidativo. La expresión o actividad desregulada de GPX4 se ha implicado en contextos de daño oxidativo y biología asociada a la ferroptosis, incluidos la neurodegeneración, la adaptación al estrés de células cancerosas y mecanismos relacionados con isquemia-reperfusión.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPX4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPX4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPX4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPX4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.