Plásmido Doble Nickase (h) Glutathione Peroxidase 3/GPX3: sc-402413-NIC

GPX3 codifica la glutatión peroxidasa 3, una selenoenzima secretada que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos lipídicos utilizando glutatión como donador de electrones, limitando el estrés oxidativo extracelular. Al modular las especies reactivas de oxígeno en el microambiente, GPX3 influye en vías de señalización sensibles al estado redox y en procesos como la inflamación, la remodelación de la matriz extracelular y la supervivencia celular. La expresión alterada de GPX3 se ha asociado con fenotipos vinculados al estrés oxidativo y se estudia con frecuencia en contextos que incluyen la disfunción metabólica, la biología cardiovascular y la biología tumoral. Por lo tanto, GPX3 sirve como un nodo útil para analizar cómo la capacidad antioxidante extracelular moldea la homeostasis redox y las redes de señalización downstream.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPX3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPX3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPX3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPX3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.