Plásmido Doble Nickase (h) GluR-δ2: sc-403400-NIC

GRID2 codifica el receptor de glutamato delta-2 (GluR-δ2), un miembro de la familia de receptores ionotrópicos de glutamato que está altamente enriquecido en las neuronas de Purkinje del cerebelo y funciona principalmente como organizador sináptico más que como un canal canónico activado por ligando. GluR-δ2 participa en complejos de señalización transináptica que regulan la formación de sinapsis entre las fibras paralelas y las células de Purkinje, el mantenimiento sináptico y la plasticidad dependiente de la actividad, influyendo en vías intracelulares vinculadas a la remodelación de espinas y a la depresión a largo plazo. Las alteraciones en la función o la expresión de GRID2 se asocian con una circuitería cerebelosa alterada y se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos caracterizados por deterioro de la coordinación motora y ataxia. En consecuencia, GRID2 se estudia con frecuencia en mecanismos de sinaptogénesis, especificación de sinapsis excitatorias y fisiología de redes cerebelosas.

GluR-δ2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRID2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRID2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRID2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRID2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.