Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) GluR-4: sc-403414-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GluR-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GluR-4 Double Nickase (h) et le plasmide GluR-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRIA4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GluR-4 Antibody (F-9): sc-271894
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GluR-4 | sc-403414-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GluR-4 | sc-403414-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIA4 code la sous-unité GluR-4 (GluA4) des récepteurs ionotropes du glutamate de type AMPA, qui assurent une neurotransmission excitatrice rapide dans le système nerveux central. Les récepteurs contenant GluR-4 régulent la plasticité synaptique, la maturation des circuits dépendante de l’activité et l’excitabilité neuronale via une conductance Na⁺/K⁺ activée par le ligand et des cascades de signalisation en aval liées au Ca²⁺. La fonction de GRIA4 s’articule avec l’organisation des synapses glutamatergiques, le trafic des récepteurs et la modulation du gating du canal dépendante de la phosphorylation. Une dérégulation de la composition des récepteurs AMPA ou de leur signalisation a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui fait de GRIA4 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des synapses excitatrices.
GluR-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRIA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRIA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRIA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRIA4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.