Plasmide Double Nickase (h) GluR-3: sc-403848-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GluR-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GluR-3 Double Nickase (h) et le plasmide GluR-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRIA3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GluR-3 Antibody (1D2E2): sc-517202
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GluR-3 | sc-403848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GluR-3 | sc-403848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIA3 code pour la sous-unité 3 (GluR-3) du récepteur ionotrope au glutamate de type AMPA chez l’humain, un canal cationique activé par un ligand qui assure la transmission synaptique excitatrice rapide dans le système nerveux central. GluR-3 contribue à la plasticité synaptique dépendante de l’activité via le trafic des récepteurs, la phosphorylation et des interactions avec les échafaudages de la densité postsynaptique, le reliant à des cascades de signalisation dépendantes du calcium et à l’excitabilité des réseaux neuronaux. La fonction des récepteurs AMPA dépendante de GRIA3 s’inscrit dans les voies de neurotransmission glutamatergique qui régulent l’apprentissage, la mémoire et les réponses au stress excitotoxique. Des perturbations génétiques et fonctionnelles des sous-unités des récepteurs AMPA, y compris GRIA3, ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques des dysfonctions synaptiques.
GluR-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRIA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRIA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRIA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRIA3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.