Plasmide CRISPR d'Activation (m) Glucose Transporter Glut1: sc-422998-ACT

Slc2a1 code le transporteur de glucose 1 (GLUT1), un transporteur membranaire facilitatif qui assure l’absorption basale de glucose et contribue au maintien de l’homéostasie énergétique cellulaire. Dans les tissus murins, GLUT1 soutient le flux glycolytique et les apports à la voie des pentoses phosphates en contrôlant la disponibilité du glucose, ce qui influence l’équilibre redox et la capacité biosynthétique. Son activité est étroitement liée à l’adaptation métabolique en situation d’hypoxie et de stress nutritif, en s’intégrant à des voies telles que la signalisation HIF et la détection énergétique régulée par l’AMPK. Une expression dérégulée de Slc2a1/GLUT1 est fréquemment étudiée dans des contextes de métabolisme altéré et de biologie des barrières ou vasculaire, où des modifications du transport du glucose peuvent affecter la survie et la prolifération cellulaires ainsi que les réponses inflammatoires.

Glucose Transporter Glut1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Slc2a1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Slc2a1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Slc2a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Slc2a1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Slc2a1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.