Partículas Lentivirales de Activación (h) GLP-1R: sc-400847-LAC

GLP1R codifica el receptor del péptido similar al glucagón tipo 1 (GLP-1R), un GPCR de clase B que se acopla principalmente a Gαs para elevar el cAMP y activar la señalización PKA/EPAC. Entre sus efectos aguas abajo se incluyen la transcripción dependiente de CREB, la modulación de la dinámica del calcio intracelular y el crosstalk de vías con MAPK/ERK y PI3K/AKT, lo que determina la excitabilidad celular, la secreción y los programas génicos metabólicos. En la biología de los islotes pancreáticos, la señalización de GLP-1R potencia la secreción de insulina estimulada por glucosa y respalda las respuestas funcionales de las células β, mientras que en tejidos extrapancreáticos contribuye a la señalización neuroendocrina y gastrointestinal. La alteración de la expresión o la señalización de GLP1R se ha implicado en fenotipos de desregulación metabólica relevantes para la investigación de diabetes y obesidad, y proporciona una base mecanística para estudiar el control transcripcional impulsado por cAMP en sistemas celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral GLP-1R (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GLP1R en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GLP-1R (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GLP1R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GLP-1R. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GLP1R y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.