Plásmido CRISPR de Activación (h) GLI-1/GLI1: sc-400266-ACT

GLI1 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que actúa como efector terminal central de la señalización Hedgehog, integrando señales ascendentes de PTCH1 y SMO para regular programas génicos que controlan la proliferación, la diferenciación y el patrón tisular. En el núcleo, GLI-1 se une a elementos consenso de GLI para modular la expresión de dianas implicadas en la progresión del ciclo celular, estados tipo célula madre y la transición epitelio‑mesénquima. La comunicación cruzada con vías como TGF-β, MAPK y PI3K/AKT puede ajustar la salida transcripcional de GLI1 y los fenotipos específicos del contexto. La actividad desregulada de GLI1 se utiliza con frecuencia como lectura molecular de una señalización aberrante de la vía Hedgehog en cánceres y otros trastornos del desarrollo.

GLI-1/GLI1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLI-1/GLI1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLI-1/GLI1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLI-1/GLI1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLI-1/GLI1 en células tumorales con expresión de GLI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.