GLG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422869

Descripción general

Glg1 codifica GLG1, una glucoproteína asociada al aparato de Golgi implicada en la clasificación y el transporte de proteínas dentro de la vía secretora, lo que favorece el procesamiento y la localización adecuados de la carga a lo largo del sistema endomembranoso. Gracias a su residencia en el Golgi y al contexto de glucosilación luminal, GLG1 contribuye al transporte regulado de proteínas que influyen en las interacciones célula–célula y en la comunicación con la matriz extracelular. Las alteraciones en la organización del Golgi y en el procesamiento de glucoproteínas se asocian con frecuencia con una adhesión, migración y respuestas al estrés desreguladas, lo que convierte a Glg1 en un nodo útil para investigar cómo las perturbaciones de la vía secretora remodelan los fenotipos celulares. En modelos murinos y sistemas de células primarias, la perturbación de Glg1 puede aprovecharse para estudiar, a nivel de vía, las consecuencias de la disfunción del Golgi sobre la salida de señales y la proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GLG1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Glg1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Glg1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Glg1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GLG1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Glg1 para la investigación de la señalización de GLG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Glg1 críticos para la función de GLG1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Glg1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GLG1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GLG1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Glg1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GLG1 (m) y el plásmido HDR GLG1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Glg1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Glg1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.