GKLF/KLF4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400312-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GKLF/KLF4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h) e il GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KLF4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GKLF/KLF4 Antibody (B-8): sc-393462
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GKLF/KLF4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400312-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GKLF/KLF4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400312-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLF4 (GKLF) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola la differenziazione epiteliale, il controllo del ciclo cellulare e il mantenimento dell’identità cellulare. Modulando programmi trascrizionali legati alle vie di segnalazione MAPK, Wnt/β-catenina e TGF-β, KLF4 influenza la proliferazione, la funzione di barriera e le risposte allo stress, includendo anche interazioni con i checkpoint dipendenti da p53. KLF4 è inoltre uno dei fattori canonici di riprogrammazione e contribuisce al rimodellamento dello stato della cromatina durante la conversione di linea cellulare. Un’attività di KLF4 deregolata è stata associata ad alterazioni degli stati di differenziazione e a ruoli dipendenti dal contesto nell’oncogenesi e nelle patologie infiammatorie, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale.
GKLF/KLF4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLF4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLF4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLF4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLF4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.