Plásmido CRISPR de Activación (h) GILZ: sc-401424-ACT

TSC22D3 codifica la proteína “glucocorticoid-induced leucine zipper” (GILZ), un regulador sensible al estrés y a las hormonas que vincula la señalización del receptor de glucocorticoides con el control transcripcional de programas inmunitarios e inflamatorios. GILZ modula vías como NF-κB y AP-1, moldeando la expresión de citocinas, la activación de linfocitos T y la polarización de macrófagos, y puede influir en la supervivencia y la diferenciación celular mediante interacciones con nodos de señalización relacionados con MAPK y PI3K/AKT. La alteración de la expresión de TSC22D3/GILZ se ha asociado con estados inflamatorios desregulados y patología mediada por el sistema inmunitario, y se estudia con frecuencia en contextos donde son relevantes la respuesta a glucocorticoides, la tolerancia o los mecanismos de inmunosupresión. Estas propiedades hacen de GILZ una herramienta molecular útil para desentrañar redes transcripcionales que gobiernan la inflamación, la adaptación al estrés y funciones inmunitarias específicas de linaje en células humanas.

GILZ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TSC22D3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GILZ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TSC22D3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TSC22D3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GILZ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TSC22D3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GILZ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GILZ en células tumorales con expresión de TSC22D3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.