Plásmido CRISPR de Activación (h) GI24: sc-407831-ACT

VSIR codifica el receptor inmunorregulador GI24 (también conocido como VISTA), una molécula de punto de control de la familia B7 expresada predominantemente en los compartimentos hematopoyético y mieloide, que modula la activación de las células T y la tolerancia periférica. GI24 participa en la señalización de la sinapsis inmunológica y en vías supresoras que moldean la producción de citocinas, la función de las células presentadoras de antígeno y los umbrales inflamatorios dentro de los microambientes tisulares. La expresión desregulada de VSIR se ha asociado con fenotipos alterados de evasión inmunitaria y patrones de infiltración inmune en el cáncer, así como con respuestas inflamatorias aberrantes en contextos de enfermedades autoinmunes e infecciosas. Como resultado, VSIR se estudia con frecuencia en vías que gobiernan el agotamiento de las células T, la inmunosupresión impulsada por células mieloides y la comunicación cruzada entre tumor e inmunidad.

GI24 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VSIR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GI24 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VSIR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VSIR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GI24. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VSIR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GI24 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GI24 en células tumorales con expresión de VSIR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.