Particules Lentivirales d'Activation (m) GHR: sc-420549-LAC

Le gène murin **Ghr** code le récepteur de l’hormone de croissance (GHR), un récepteur de cytokine à passage unique qui relaie la signalisation endocrine et paracrine de l’hormone de croissance dans le foie, le tissu adipeux, le muscle squelettique et les cellules immunitaires. La liaison du ligand favorise la dimérisation du récepteur et l’activation de JAK2, avec, en aval, les voies STAT5, PI3K–AKT et MAPK/ERK, coordonnant la croissance somatique, le métabolisme des lipides et du glucose, ainsi que le remodelage tissulaire. Les programmes transcriptionnels dépendants de GHR régulent des composants de l’axe IGF et des enzymes métaboliques, reliant l’activité du récepteur à l’homéostasie énergétique de l’organisme. Une signalisation GHR dérégulée a été utilisée pour modéliser des phénotypes de croissance altérés, des dysfonctions métaboliques hépatiques et du tissu adipeux, ainsi que des modifications des voies inflammatoires en recherche biomédicale.

Les particules d'activation lentivirales GHR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ghr dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GHR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ghr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GHR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ghr ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.