Plasmide Double Nickase (h) GHR: sc-401382-NIC

GHR code le récepteur de l’hormone de croissance, un récepteur de cytokines transmembranaire à passage unique qui se lie à l’hormone de croissance hypophysaire afin de réguler la croissance postnatale, le métabolisme et l’homéostasie tissulaire. La dimérisation du récepteur induite par le ligand active JAK2 et, en aval, la signalisation STAT5, avec un couplage additionnel aux voies PI3K–AKT et MAPK/ERK qui modulent la prolifération, la survie et les programmes transcriptionnels. La signalisation via GHR influence la production hépatique d’IGF‑1 ainsi que des boucles de rétrocontrôle endocrines plus larges, en intégrant l’état nutritionnel à des réponses anaboliques et lipolytiques. Une activité de GHR dérégulée et les interactions entre voies de signalisation (crosstalk) ont été étudiées dans divers contextes, notamment les troubles de la croissance, des phénotypes de sensibilité à l’insuline et des réseaux de signalisation oncogéniques où les sorties JAK/STAT et MAPK contribuent à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

GHR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GHR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GHR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GHR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GHR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.