Plásmido CRISPR de Activación (m) GHR: sc-420549-ACT

El gen **Ghr** de ratón codifica el receptor de la hormona del crecimiento (GHR), un receptor de citocinas transmembrana que se une a la hormona del crecimiento para regular el crecimiento somático, el metabolismo y la homeostasis tisular. La unión del ligando promueve la dimerización del receptor y la activación de JAK2, impulsando la señalización posterior de STAT5, así como la comunicación cruzada con las vías PI3K–AKT y MAPK/ERK para controlar programas transcripcionales de proliferación, diferenciación y utilización de nutrientes. La actividad de GHR modula la producción hepática de IGF-1 e influye en la fisiología del tejido adiposo, el músculo y el hueso, lo que lo convierte en un componente central de la regulación endocrina del crecimiento y del equilibrio energético. La desregulación de la señalización de GHR se ha asociado con fenotipos de crecimiento alterados y disfunción metabólica, y se estudia con frecuencia en contextos de biología del desarrollo, envejecimiento y remodelación de vías endocrinas.

GHR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ghr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GHR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ghr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ghr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GHR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ghr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GHR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GHR en células tumorales con expresión de Ghr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.