GFRαL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-415831

Descripción general

GFRAL (receptor alfa similar a la familia GDNF) codifica un correceptor anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que confiere especificidad de ligando al receptor tirosina quinasa RET, especialmente en respuesta a la citocina de estrés GDF15. La señalización de RET dependiente de GFRαL activa las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT aguas abajo para regular respuestas celulares a señales metabólicas e inflamatorias, con una relevancia destacada en el control neuroendocrino del balance energético. Su expresión está enriquecida en poblaciones neuronales discretas del rombencéfalo, lo que respalda funciones en la detección de nutrientes y la homeostasis sistémica. La desregulación del eje GDF15–GFRαL–RET se ha asociado con fenotipos tipo caquexia, trastornos metabólicos y efectos sistémicos relacionados con el cáncer, lo que convierte a GFRAL en una diana útil para el análisis de esta vía en modelos relevantes de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GFRαL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GFRAL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GFRAL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GFRAL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GFRαL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GFRAL para la investigación de la señalización de GFRαL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GFRAL críticos para la función de GFRαL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GFRAL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GFRαL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GFRαL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GFRAL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GFRαL (h) y el plásmido HDR GFRαL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GFRAL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GFRAL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.