Plasmide Double Nickase (h) GFRα-2: sc-404010-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GFRα-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GFRα-2 Double Nickase (h) et le plasmide GFRα-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GFRA2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GFRα-2 | sc-404010-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GFRα-2 | sc-404010-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFRA2 code le co-récepteur ancré par glycosylphosphatidylinositol (GPI) GFRα-2, composant de liaison au ligand du complexe récepteur de la famille GDNF, qui se lie préférentiellement à la neurturine. En présentant le ligand à la tyrosine kinase RET, GFRα-2 contribue à initier la signalisation en aval via les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, soutenant des programmes de survie neuronale, de différenciation et de guidage axonal. L’expression de GFRA2 est enrichie dans le système nerveux et est largement utilisée comme marqueur de lignées neuronales spécifiques et d’états de développement. Des altérations de la dynamique de signalisation RET–GFRα ont été impliquées dans la recherche sur le neurodéveloppement et les maladies neurodégénératives, et sont également étudiées dans des cancers où l’activité de la voie RET contribue à des phénotypes cellulaires.
GFRα-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GFRA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GFRA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GFRA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GFRA2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.