Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
GFAT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403022-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GFAT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GFAT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GFAT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GFPT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GFAT1: sc-377479
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GFAT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403022-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GFAT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403022-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFPT1 kodiert die Glutamin—Fructose-6-phosphat-Aminotransferase 1 (GFAT1), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym des Hexosamin-Biosynthesewegs, der Fructose-6-phosphat und Glutamin zu Glucosamin-6-phosphat umsetzt. Durch die Steuerung des Flusses in Richtung UDP-GlcNAc-Produktion beeinflusst GFAT1 die N- und O-GlcNAcylierung von Proteinen, die Qualitätskontrolle von Proteinen im ER sowie metabolisches Sensing in Abhängigkeit von der Verfügbarkeit von Glukose und Aminosäuren. Dieser Signalweg überschneidet sich mit der Insulinsignalisierung, Stressantworten und der Glykoproteinsynthese, wodurch GFPT1 eine zentrale Schnittstelle darstellt, die den Nährstoffstatus mit posttranslationalen Modifikationen und der zellulären Homöostase verknüpft. Eine veränderte GFPT1-Aktivität und der Output des Hexosaminwegs wurden mit dem kongenitalen myasthenen Syndrom sowie mit fehlregulierter Glykosylierung und metabolischen Phänotypen in krankheitsrelevanten Kontexten beim Menschen in Verbindung gebracht.
GFAT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GFPT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GFPT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GFPT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GFPT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.