Plásmido CRISPR de Activación (h) GFAP: sc-400130-ACT

La proteína ácida fibrilar glial (GFAP) es una proteína de filamentos intermedios que define la identidad de los astrocitos y contribuye a la organización del citoesqueleto, a la estabilidad mecánica celular y a la remodelación de sus prolongaciones en el sistema nervioso central. La dinámica de la GFAP se entrecruza con programas de reactividad astrocitaria y con redes de señalización como JAK/STAT y MAPK, que modulan la gliosis, la neuroinflamación y las respuestas de reparación tisular. La alteración de la expresión de GFAP y de la arquitectura de sus filamentos se asocia con disfunción de los astrocitos en afecciones neurológicas y neurodegenerativas, y la GFAP se utiliza ampliamente como marcador molecular del estado de activación y del linaje de los astrocitos. La modulación experimental de la GFAP respalda estudios sobre la maduración de los astrocitos, las interacciones neurona–glía y la remodelación del citoesqueleto en respuesta al estrés.

GFAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GFAP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GFAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GFAP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GFAP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GFAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GFAP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GFAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GFAP en células tumorales con expresión de GFAP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.