GEN1 Double Nickase Plasmid (h): sc-410437-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GEN1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GEN1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GEN1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GEN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GEN1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GEN1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GEN1 kodiert eine strukturspezifische Endonuklease, die Holliday-Junctions und andere Rekombinationszwischenprodukte während der homologen Rekombination auflöst und damit den Abschluss der Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen sowie eine korrekte Chromosomensegregation unterstützt. Das Protein wirkt in Wegen der Genomstabilität, die mit replikationsgekoppelter Reparatur, Checkpoint-Signalgebung und der Wiederherstellung ins Stocken geratener oder kollabierter Replikationsgabeln verknüpft sind. Eine Beeinträchtigung der GEN1-Aktivität kann die chromosomale Instabilität und die Bildung von Mikrokernen erhöhen und verbindet eine gestörte Junction-Auflösung mit einer erhöhten Mutationslast in proliferierenden Geweben. Daher wird GEN1 häufig im Kontext der Organisation von DNA-Reparaturnetzwerken, von Antworten auf Replikationsstress und von Mechanismen untersucht, die krebsassoziierte genomische Umlagerungen prägen.
GEN1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GEN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GEN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GEN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GEN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.