Plasmide CRISPR d'Activation (h) Gemin2: sc-403867-ACT

Le gène humain **GEMIN2** code **Gemin2**, un composant central du complexe **SMN–Gemin** qui orchestre l’assemblage des petites ribonucléoprotéines nucléaires de classe Sm (**snRNP**) nécessaires à la biogenèse du spliceosome et à l’épissage des pré-ARNm. Grâce à des interactions directes avec les protéines Sm et SMN, Gemin2 contribue à contrôler la maturation des snARN, le contrôle qualité des snRNP et, plus largement, des programmes de métabolisme de l’ARN qui influencent l’intégrité du transcriptome. L’altération de la fonction du complexe SMN et de l’assemblage des snRNP est mécaniquement liée à la neurodégénérescence et à la biologie des motoneurones, et **GEMIN2** a été étudié dans le contexte de défauts de traitement de l’ARN et de réponses au stress cellulaire. La perturbation de **GEMIN2** est également utilisée pour explorer comment l’homéostasie du spliceosome remodèle des réseaux d’expression génique pertinents pour la prolifération et la différenciation.

Gemin2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GEMIN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Gemin2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GEMIN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GEMIN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Gemin2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GEMIN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Gemin2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Gemin2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GEMIN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.