GEFT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406707

Panoramica

ARHGEF25 codifica GEFT, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) per Rho che attiva GTPasi della famiglia Rho come Rac1 e Cdc42, coordinando il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e la motilità. La segnalazione mediata da GEFT si integra con vie dipendenti dalle GTPasi Rho che controllano la dinamica delle adesioni focali, il ruffling di membrana e la crescita dei neuriti, collegando segnali extracellulari a programmi trascrizionali e morfologici a valle. Una segnalazione Rho GTPasica deregolata e un’alterata attività di ARHGEF25 sono state associate a fenotipi anomali di migrazione e invasione in ambito oncologico, nonché a più ampi difetti dell’organizzazione del citoscheletro rilevanti in contesti neuro-sviluppativi e infiammatori. In quanto nodo a monte di molteplici effettori dipendenti da Rho, GEFT viene spesso studiato per chiarire i meccanismi di morfogenesi, adesione e trasduzione del segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GEFT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARHGEF25 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARHGEF25 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARHGEF25 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GEFT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARHGEF25 per lo studio della segnalazione di GEFT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ARHGEF25 critici per la funzione di GEFT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARHGEF25 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GEFT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GEFT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARHGEF25. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GEFT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GEFT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARHGEF25 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARHGEF25 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.