GEFT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406707

Descripción general

ARHGEF25 codifica GEFT, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de Rho que activa GTPasas de la familia Rho como Rac1 y Cdc42 para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y la motilidad. La señalización mediada por GEFT se integra con vías dependientes de GTPasas Rho que controlan la dinámica de las adhesiones focales, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y el crecimiento de neuritas, conectando señales extracelulares con programas transcripcionales y morfológicos posteriores. La desregulación de la señalización de GTPasas Rho y la alteración de la actividad de ARHGEF25 se han asociado con fenotipos anómalos de migración e invasión en biología del cáncer, así como con defectos más amplios en la organización del citoesqueleto relevantes en contextos neurodeliberativos e inflamatorios. Como nodo situado aguas arriba de múltiples efectores dependientes de Rho, GEFT se investiga con frecuencia para dilucidar mecanismos de morfogénesis, adhesión y transducción de señales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GEFT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ARHGEF25 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ARHGEF25 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ARHGEF25 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GEFT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ARHGEF25 para la investigación de la señalización de GEFT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ARHGEF25 críticos para la función de GEFT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ARHGEF25 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GEFT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GEFT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ARHGEF25. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GEFT (h) y el plásmido HDR GEFT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ARHGEF25 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ARHGEF25 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.