Plásmido CRISPR de Activación (h) GD3 Synthase: sc-404015-ACT

ST8SIA1 codifica la sintasa de GD3, una sialiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la conversión de GM3 en el disialogangliósido GD3, configurando la composición de los glicoesfingolípidos en la membrana plasmática. Al modular los microdominios de membrana dependientes de gangliósidos, la sintasa de GD3 influye en la señalización de receptores, las interacciones célula–célula y los procesos de tráfico vesicular que se integran con vías que controlan la proliferación, la migración y las respuestas al estrés. La actividad alterada de ST8SIA1 se ha vinculado a cambios en los patrones de glicosilación observados en biología del cáncer y neurobiología, donde el equilibrio de gangliósidos puede afectar programas de diferenciación y el reconocimiento inmunitario. Estas propiedades hacen de ST8SIA1 un nodo útil para analizar la regulación de redes de señalización y la organización de la membrana impulsadas por la sialilación.

GD3 Synthase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ST8SIA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GD3 Synthase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ST8SIA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ST8SIA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GD3 Synthase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ST8SIA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GD3 Synthase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GD3 Synthase en células tumorales con expresión de ST8SIA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.