Plásmido CRISPR de Activación (m) GCN5: sc-420512-ACT

El gen murino Kat2a codifica GCN5, una acetiltransferasa de lisina que acetila la histona H3 (incluidas H3K9 y H3K14) para promover la accesibilidad de la cromatina y la activación transcripcional. Como componente central de complejos coactivadores multisubunidad como SAGA y ATAC, GCN5 integra señales con programas de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La actividad de Kat2a influye en la dinámica de potenciadores y promotores, la respuesta al daño del ADN y la regulación de genes metabólicos mediante una acetilación coordinada de histonas y la coactivación de factores de transcripción. La desregulación del control epigenético dependiente de GCN5 se ha asociado con proliferación aberrante y especificación de linaje anómala, lo que convierte a Kat2a en un nodo útil para modelar mecanismos impulsados por la cromatina en estados celulares relevantes para enfermedades.

GCN5 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Kat2a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GCN5 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Kat2a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Kat2a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GCN5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Kat2a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GCN5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GCN5 en células tumorales con expresión de Kat2a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.