Plásmido CRISPR de Activación (m) GCN2: sc-424196-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) GCN2 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) GCN2 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR GCN2 (m) y el plásmido de activación CRISPR GCN2 (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Eif2ak4. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) GCN2 | sc-424196-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen murino **Eif2ak4** codifica **GCN2**, una proteína cinasa de serina/treonina que detecta la limitación de aminoácidos mediante la unión a ARNt no cargados e inicia la respuesta integrada al estrés. Tras su activación, GCN2 fosforila **eIF2α** para reducir la traducción global, al tiempo que promueve programas de traducción selectiva como la transcripción dependiente de **ATF4**, conectando el estrés por nutrientes con el metabolismo adaptativo y el control redox. Esta vía se entrecruza con la señalización de **mTORC1**, la regulación de la autofagia y el control de calidad asociado al ribosoma durante desafíos de proteostasis. La señalización desregulada de GCN2 se ha implicado en fenotipos inflamatorios y metabólicos, respuestas al estrés asociadas a neurodegeneración y la adaptación de células tumorales a microambientes pobres en nutrientes, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de biología del estrés.
GCN2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Eif2ak4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
GCN2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Eif2ak4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Eif2ak4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GCN2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Eif2ak4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GCN2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GCN2 en células tumorales con expresión de Eif2ak4 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.