Plásmido Doble Nickase (h) GCKR: sc-401623-NIC

GCKR codifica la proteína reguladora de la glucocinasa (GKRP), un modulador del sensor de glucosa enriquecido en hepatocitos que controla la actividad de la glucocinasa (GCK) mediante su secuestro y liberación en respuesta a señales metabólicas. A través de la regulación del flujo glucolítico hepático, la síntesis de glucógeno y la lipogénesis de novo, GCKR influye en la homeostasis central de carbohidratos y lípidos y en la señalización relacionada con la insulina. La variación genética o la expresión alterada de GCKR se ha asociado con cambios en la glucosa en ayunas, los niveles de triglicéridos y fenotipos más amplios de rasgos metabólicos, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el balance energético y los programas transcripcionales sensibles a los nutrientes. La investigación sobre GCKR respalda el análisis mecanístico del metabolismo hepático, la comunicación cruzada endocrina y las respuestas al estrés metabólico en modelos celulares relevantes.

GCKR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GCKR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GCKR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GCKR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GCKR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.