Plásmido Doble Nickase (h) GCH-I: sc-402386-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GCH-I consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GCH-I (h) y el plásmido de doble nickasa GCH-I (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GCH1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GCH-I Anticuerpo (G-8): sc-376483
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GCH-I | sc-402386-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GCH-I | sc-402386-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GCH1 codifica la GTP ciclohidrolasa I (GCH-I), la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de novo de tetrahidrobiopterina (BH4) a partir de GTP. La BH4 es un cofactor esencial, activo en reacciones redox, para las hidroxilasas de aminoácidos aromáticos y para todas las isoformas de la sintasa de óxido nítrico, lo que vincula la actividad de GCH-I con la producción de catecolaminas y serotonina, así como con la señalización del óxido nítrico y el equilibrio redox celular. Las alteraciones en la función de GCH1 pueden perturbar el metabolismo de neurotransmisores y las vías endoteliales del óxido nítrico, por lo que es relevante para estudios de la homeostasis neurometabólica, la biología vascular y el estrés oxidativo. Las variantes en GCH1 se asocian con trastornos hereditarios de neurotransmisores y se han investigado en el contexto de la sensibilidad al dolor y de fenotipos neuropsiquiátricos, lo que respalda la investigación mecanística sobre las relaciones entre genotipo y vías biológicas.
GCH-I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GCH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GCH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GCH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GCH1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.