Plásmido CRISPR de Activación (h) GCC2: sc-411304-ACT

El gen humano GCC2 (GRIP and coiled-coil domain containing 2) codifica una proteína periférica del aparato de Golgi que se localiza en la red trans-Golgi, donde participa en el anclaje (tethering) de vesículas y en el tráfico de membranas, procesos importantes para la clasificación de la carga y el mantenimiento de la arquitectura del Golgi. Mediante interacciones con la maquinaria de tráfico regulada por pequeñas GTPasas, GCC2 contribuye a la dinámica del transporte endosoma–Golgi que modela el procesamiento y la secreción de proteínas. La alteración de las vías de anclaje y tráfico del Golgi es ampliamente relevante para la homeostasis celular, incluidas las respuestas al estrés, la polaridad y los programas de secreción regulada. Se ha estudiado la expresión o función alteradas de proteínas ancladoras asociadas al Golgi con dominios coiled-coil, como GCC2, en el contexto de enfermedades en las que el tráfico de membranas y la secreción están desregulados, entre ellas el cáncer y procesos relacionados con la neurodegeneración.

GCC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GCC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GCC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GCC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GCC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GCC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GCC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GCC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GCC2 en células tumorales con expresión de GCC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.