Plasmide CRISPR d'Activation (h) GC-C: sc-403413-ACT

Le gène humain **GUCY2C** code la guanylate cyclase C (GC‑C), un récepteur de la membrane apicale et une guanylyl cyclase particulaire qui catalyse la production de **cGMP** en réponse aux peptides endogènes de type guanyline et aux entérotoxines dans l’épithélium intestinal. La signalisation du cGMP induite par GC‑C régule la sécrétion de chlorure et de bicarbonate dépendante de **CFTR**, l’équilibre hydrique épithélial, la fonction de barrière, ainsi que les programmes de prolifération–différenciation via des effecteurs en aval, notamment **PKG** et des voies dépendantes des canaux activés par les nucléotides cycliques. Cet axe de signalisation s’intègre à l’homéostasie intestinale et aux réponses inflammatoires, et des altérations de l’expression ou de la signalisation de **GUCY2C** ont été associées à la physiopathologie gastro-intestinale et à des états épithéliaux liés aux tumeurs. En tant que récepteur membranaire dont la régulation transcriptionnelle dépend du contexte, GC‑C est fréquemment étudiée en signalisation épithéliale, immunologie des muqueuses et interactions avec les voies oncogéniques.

GC-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GUCY2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GC-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GUCY2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GUCY2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GC-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GUCY2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GC-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GC-C dans les cellules tumorales présentant une expression de GUCY2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.