Plasmide CRISPR d'Activation (h) GBX2: sc-404749-ACT

GBX2 (gastrulation brain homeobox 2) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la régionalisation et les décisions de destinée cellulaire durant l’embryogenèse précoce et le neurodéveloppement. Dans les cellules humaines, GBX2 coordonne des programmes transcriptionnels impliqués dans la spécification neurale selon l’axe antéro-postérieur et interagit avec des réseaux de signalisation du développement, notamment les voies dépendantes de WNT/β-caténine, de FGF et de l’acide rétinoïque. Une expression dérégulée de GBX2 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, où une altération du contrôle transcriptionnel développemental peut contribuer à une prolifération aberrante, à un blocage de la différenciation et à des changements de lignée. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, GBX2 est couramment étudié pour son rôle dans les circuits transcriptionnels, la modulation des états de la chromatine et le remaniement des réseaux géniques du développement dans des modèles de cancer et de cellules souches.

GBX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GBX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GBX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GBX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GBX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GBX2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GBX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GBX2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GBX2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GBX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.