Plásmido CRISPR de Activación (h) GBP3: sc-402792-ACT

La GBP3 humana (proteína de unión a guanilato 3) es una GTPasa grande inducible por interferón que favorece la inmunidad intrínseca de la célula al modular respuestas antimicrobianas e inflamatorias. GBP3 participa en programas de señalización de IFN-γ/STAT y puede influir en vías de defensa del hospedador vinculadas a la restricción de patógenos, procesos adyacentes al inflamasoma y remodelación transcripcional impulsada por citocinas. Se ha informado de una expresión alterada de GBP3 en diversas afecciones mediadas por el sistema inmunitario y en múltiples contextos de cáncer, lo que refleja su estrecha relación con las redes de genes estimulados por interferón y con las interacciones tumor–inmunidad. En consecuencia, GBP3 es un nodo útil para investigar circuitos sensibles al interferón, estados de activación de la inmunidad innata y fenotipos transcripcionales asociados al estrés en células humanas.

GBP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GBP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GBP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GBP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GBP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GBP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GBP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GBP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GBP3 en células tumorales con expresión de GBP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.