Plásmido CRISPR de Activación (h) Gas1: sc-404384-ACT

El GAS1 humano (growth arrest specific 1) codifica una proteína de superficie celular anclada a GPI que modula la señalización de morfógenos y el control del ciclo celular, con funciones destacadas en el patrón del desarrollo y la regulación de la proliferación. Gas1 puede influir en la actividad de la vía Hedgehog mediante interacciones con ligandos y receptores en la membrana plasmática, conectando señales extracelulares con programas transcripcionales que determinan la diferenciación y la detención del crecimiento. La alteración de la expresión de GAS1 se ha asociado con una señalización Hedgehog desregulada y con cambios en las decisiones de destino celular, procesos que se estudian con frecuencia en el neurodesarrollo, la homeostasis tisular y la biología tumoral. Como regulador localizado en la membrana, GAS1 también es relevante para investigar la organización de receptores, el establecimiento de umbrales de señalización y la comunicación cruzada entre vías dependiente del contexto.

Gas1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GAS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gas1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GAS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GAS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gas1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GAS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gas1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gas1 en células tumorales con expresión de GAS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.