gamma Synuclein/SNCG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401050-ACT

SNCG codifica a gama-sinucleína, uma pequena proteína neuronal implicada na função sináptica, na dinâmica do citoesqueleto e no tráfego vesicular, com papéis mais amplos nas respostas celulares ao estresse. Em contextos não neuronais, a gama-sinucleína tem sido associada à modulação da estabilidade dos microtúbulos, à propensão à agregação proteica e a programas de sinalização que influenciam a proliferação e a migração. A expressão desregulada de SNCG foi relatada em múltiplos tipos de câncer e é frequentemente estudada como um marcador de progressão tumoral e potencial metastático, ao mesmo tempo em que se cruza com vias relevantes para a neurodegeneração. Essas características tornam o SNCG um nó útil para dissecar o controle transcricional, a proteostase e redes de sinalização associadas ao citoesqueleto.

gamma Synuclein/SNCG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNCG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gamma Synuclein/SNCG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNCG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNCG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gamma Synuclein/SNCG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNCG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gamma Synuclein/SNCG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gamma Synuclein/SNCG em células tumorais com expressão de SNCG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.