Plasmide CRISPR/Cas9 KO GALR3 (h): sc-406303

Présentation

GALR3 code le récepteur 3 de la galanine, un RCPG de classe A qui se lie au neuropeptide galanine et à des ligands apparentés afin de moduler l’excitabilité neuronale et la signalisation neuroendocrinienne. Lorsqu’il est activé, GALR3 se couple principalement à des protéines G inhibitrices, ce qui influence l’activité de l’adénylyl cyclase, la régulation des canaux ioniques et des réseaux de signalisation en aval liés aux MAPK, façonnant ainsi la libération de neurotransmetteurs et les circuits sensibles au stress. L’expression de GALR3 dans le système nerveux central et dans des tissus périphériques le relie à des voies impliquées dans le contrôle de l’humeur, de la nociception, du comportement alimentaire et de la régulation autonome. Des altérations de la signalisation galanine–récepteur, notamment des changements d’expression ou d’activité de GALR3, ont été explorées dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques, ainsi que dans des études plus larges de la transduction du signal médiée par les RCPG.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GALR3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GALR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GALR3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GALR3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GALR3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GALR3 pour l'étude de la signalisation de GALR3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GALR3 essentiels à la fonction de GALR3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GALR3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GALR3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GALR3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GALR3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GALR3 plasmide HDR (h) et le GALR3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GALR3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GALR3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.