Plasmide CRISPR d'Activation (h) GALR2: sc-403779-ACT

Le gène humain **GALR2** code le récepteur de la galanine 2 (GALR2), un RCPG de classe A qui se lie au neuropeptide galanine afin de moduler l’excitabilité neuronale, la libération de neurotransmetteurs et la sécrétion neuroendocrinienne. Après liaison du ligand, GALR2 se couple principalement à Gq/11 pour activer PLCβ, la signalisation IP3/DAG, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et des voies dépendantes de la PKC, avec en plus, selon le contexte, un couplage à d’autres protéines G qui module la signalisation MAPK/ERK et les programmes d’expression génique. Ces sorties de signalisation relient GALR2 à la régulation du traitement de la douleur, des comportements liés à l’humeur, de la prise alimentaire et de l’équilibre énergétique, ainsi que de la contractilité du muscle lisse dans les tissus périphériques. Une expression ou une signalisation dérégulée de GALR2 a été étudiée dans des phénotypes neuropsychiatriques et métaboliques, ainsi qu’en biologie tumorale, où des voies pilotées par les RCPG peuvent influencer la prolifération, la survie et la migration, ce qui soutient son intérêt comme sonde de voie dans des études mécanistiques.

GALR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GALR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GALR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GALR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GALR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GALR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GALR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GALR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GALR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GALR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.