Plásmido CRISPR de Activación (h) GALR1: sc-404381-ACT

GALR1 codifica el receptor humano de galanina 1, un receptor acoplado a proteína G de tipo rodopsina que se une al neuropéptido galanina y transduce señales principalmente a través de Gi/o para inhibir la adenilil ciclasa y modular la actividad downstream de cAMP/PKA. La activación del receptor influye en la excitabilidad neuronal, la transmisión sináptica y la secreción neuroendocrina, con efectos adicionales sobre la señalización MAPK y la dinámica del calcio intracelular según el contexto celular. GALR1 contribuye a la regulación del apetito, la nocicepción, los comportamientos relacionados con el estado de ánimo y la función autonómica, y las alteraciones en la señalización galanina–GALR1 se han implicado en fenotipos neurológicos y psiquiátricos. En biología del cáncer, se han descrito expresión diferencial de GALR1 y reconfiguración de vías de GPCR en varios contextos tumorales, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para estudios de señalización y transcripción.

GALR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GALR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GALR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GALR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GALR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GALR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GALR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GALR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GALR1 en células tumorales con expresión de GALR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.