Plasmide CRISPR d'Activation (h) GALR1: sc-404381-ACT

GALR1 code le récepteur humain de la galanine 1, un récepteur couplé aux protéines G de type rhodopsine, qui se lie au neuropeptide galanine et transmet des signaux principalement via Gi/o afin d’inhiber l’adénylate cyclase et de moduler l’activité en aval de la voie AMPc/PKA. L’activation du récepteur influence l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et la sécrétion neuroendocrine, avec des effets supplémentaires sur la signalisation MAPK et la dynamique du calcium intracellulaire selon le contexte cellulaire. GALR1 contribue à la régulation de l’appétit, de la nociception, de comportements liés à l’humeur et des fonctions autonomes, et une altération de la signalisation galanine–GALR1 a été impliquée dans des phénotypes neurologiques et psychiatriques. En biologie du cancer, une expression différentielle de GALR1 et un remaniement des voies de signalisation des GPCR ont été rapportés dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui étaye son utilité comme nœud mécanistique pour des études de signalisation et de transcription.

GALR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GALR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GALR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GALR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GALR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GALR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GALR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GALR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GALR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GALR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.