Plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T13 (h): sc-407103

Présentation

GALNT13 code la polypeptide N‑acétylgalactosaminyltransférase 13 (GalNAc‑T13), une enzyme initiatrice de la O‑glycosylation de type mucine localisée dans l’appareil de Golgi, qui transfère des résidus GalNAc sur des résidus sérine/thréonine de protéines sécrétoires et membranaires naissantes. En façonnant les profils de O‑glycanes sur les récepteurs, les molécules d’adhérence et les mucines, GalNAc‑T13 peut influencer la stabilité des protéines, leur trafic intracellulaire et leurs interactions avec des ligands, ce qui alimente les processus de signalisation et de communication cellule‑cellule. Une expression altérée de GALNT13 a été rapportée dans plusieurs contextes tumoraux et s’associe à des modifications de comportements cellulaires malins tels que l’invasion et le potentiel métastatique, ce qui concorde avec un rôle de la O‑glycosylation dans le remodelage de l’interface extracellulaire. Ce gène est donc pertinent pour l’étude de la biosynthèse des glycoprotéines, du fonctionnement de la voie sécrétoire et des réseaux de signalisation régulés par la glycosylation dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T13 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GALNT13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GALNT13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GALNT13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GalNAc-T13.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GALNT13 pour l'étude de la signalisation de GalNAc-T13, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GALNT13 essentiels à la fonction de GalNAc-T13
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GALNT13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GalNAc-T13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GalNAc-T13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GALNT13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GalNAc-T13 plasmide HDR (h) et le GalNAc-T13 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GALNT13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GALNT13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.