Plásmido CRISPR de Activación (h) Galanin: sc-402730-ACT

El GAL humano codifica la galanina, un neuropéptido secretado que señaliza a través de receptores acoplados a proteína G (GALR1–3) para regular la excitabilidad neuronal, la liberación de neurotransmisores y la función neuroendocrina. La galanina modula vías de segundos mensajeros, entre ellas cAMP/PKA, MAPK/ERK y la señalización de calcio, influyendo en procesos como la regulación del apetito, la nocicepción, la respuesta al estrés y el control autonómico. En el sistema nervioso y en tejidos periféricos, la actividad de GAL contribuye a la plasticidad sináptica y al diálogo cruzado neuroinmunitario, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de fenotipos neurológicos y metabólicos. En la literatura, las alteraciones en la señalización de la galanina se han asociado con trastornos que implican el procesamiento del dolor, la regulación del estado de ánimo, la susceptibilidad a convulsiones y la homeostasis energética, lo que respalda su uso como nodo de vía en modelos relevantes para enfermedad.

Galanin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GAL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Galanin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GAL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GAL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Galanin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GAL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Galanin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Galanin en células tumorales con expresión de GAL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.