Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Gads Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421689
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Gads El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Gads, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Gads Anticuerpo (UW40): sc-73652
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Gads Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421689 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Grap2 codifica la proteína adaptadora Gads, un componente de señalización hematopoyética que conecta los receptores inmunitarios activados con vías efectoras aguas abajo. En los linfocitos T, Gads acopla LAT fosforilada con SLP-76 para ensamblar microclústeres de señalización que propagan la señalización proximal del receptor de células T, facilitando la activación de PLCγ1, el flujo de calcio, la señalización MAPK y programas transcripcionales que controlan la producción de citocinas y la proliferación. Este adaptador también participa en la señalización de otros inmunorreceptores en linajes linfoides, influyendo en los umbrales de activación celular y en la organización de la sinapsis inmunitaria. Las redes de señalización dependientes de Gads desreguladas se estudian con frecuencia en modelos de disfunción inmunitaria, fenotipos inflamatorios y alteraciones de la señalización hematopoyética.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gads (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Grap2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Grap2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Grap2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gads.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Grap2 para la investigación de la señalización de Gads, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Grap2 críticos para la función de Gads
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Grap2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Gads CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Gads CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Grap2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gads (m) y el plásmido HDR Gads (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Grap2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Grap2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.