Plasmide CRISPR d'Activation (h) GADD 45β: sc-401286-ACT

GADD45B (GADD45β) est un membre inductible par le stress de la famille « growth arrest and DNA damage–inducible » (GADD45), qui intègre des signaux génotoxiques, inflammatoires et métaboliques afin de moduler les décisions de destin cellulaire. Il participe à la réponse aux dommages de l’ADN et à la signalisation associée à la réparation, interagit avec les voies MAPK (dont JNK et p38) ainsi qu’avec des programmes régulés par NF-κB, et peut influencer le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et l’adaptation cellulaire au stress. Dans les cellules humaines, une expression dérégulée de GADD45β a été associée à une altération de la signalisation du stress et des réponses transcriptionnelles observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment en oncologie et dans des pathologies liées au système immunitaire. Ces caractéristiques font de GADD45β un nœud moléculaire utile pour disséquer la diaphonie des voies entre la signalisation des dommages à l’ADN, l’inflammation et les programmes de survie.

GADD 45β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GADD45B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GADD 45β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GADD45B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GADD45B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GADD 45β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GADD45B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GADD 45β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GADD 45β dans les cellules tumorales présentant une expression de GADD45B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.