Plasmide CRISPR/Cas9 KO GABA_A Rπ (h): sc-404623

Présentation

GABRP code la sous-unité π du récepteur humain GABA\(_A\), un canal chlorure ligand-dépendant qui assure la neurotransmission inhibitrice et module l’excitabilité membranaire. L’incorporation de la sous-unité π peut moduler l’assemblage du récepteur, la conductance ionique et les propriétés pharmacologiques, influençant ainsi la signalisation synaptique et, en aval, l’activité des réseaux neuronaux. La signalisation via les récepteurs GABA\(_A\) s’articule avec des voies dépendantes du calcium, le développement neuronal et la régulation homéostatique de l’équilibre excitation–inhibition. Des altérations de l’expression ou de la régulation de GABRP ont été étudiées dans le contexte de la biologie des maladies neuropsychiatriques et neurologiques, ainsi que dans des travaux sur la signalisation des cellules épithéliales, où des composantes GABAergiques peuvent influencer des programmes de prolifération et de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rπ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GABRP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GABRP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GABRP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GABAA Rπ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GABRP pour l'étude de la signalisation de GABAA Rπ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GABRP essentiels à la fonction de GABAA Rπ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GABRP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GABAA Rπ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GABAA Rπ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GABRP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GABAA Rπ plasmide HDR (h) et le GABAA Rπ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GABRP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GABRP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.