Plásmido Doble Nickase (h) GABA_A Rβ3: sc-403007-NIC

GABRB3 codifica la subunidad β3 del receptor humano GABA_A, un componente central de los canales de cloruro activados por ligando que median la neurotransmisión inhibitoria rápida en el sistema nervioso central. La incorporación de β3 influye en el ensamblaje del receptor, su tráfico hacia la superficie celular y sus propiedades farmacológicas, modulando la excitabilidad neuronal mediante señalización GABAérgica sináptica y extrasináptica. La actividad del receptor GABA_A se acopla a la regulación del potencial de membrana y a las oscilaciones de red, con efectos posteriores sobre la maduración sináptica y la plasticidad dependiente de la actividad. La variación genética o la expresión desregulada de GABRB3 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y relacionados con convulsiones, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la disfunción de los circuitos inhibitorios.

GABAA Rβ3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GABRB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GABRB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GABRB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GABRB3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.